Аналитическая чувствительность гост



Аналитическая чувствительность гост

ГОСТ Р 53022.2-2008

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Технологии лабораторные клинические

ТРЕБОВАНИЯ К КАЧЕСТВУ КЛИНИЧЕСКИХ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Оценка аналитической надежности методов исследования (точность, чувствительность, специфичность)

Clinical laboratory technologies. Requirements for quality of clinical laboratory tests. Part 2. Assessment of analytical reliability methods (accuracy, sensitivity, specificity)

Дата введения 2010-01-01

Цели и принципы cтандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Лабораторией проблем клинико-лабораторной диагностики Московской медицинской академии им. И.М.Сеченова Росздрава, отделом сертификации и контроля качества клинических лабораторных исследований Государственного научно-исследовательского центра профилактической медицины Росмедтехнологий

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 466 "Медицинские технологии"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 декабря 2008 г. N 555-ст

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает единые требования при оценке правильности, прецизионности, чувствительности, специфичности клинических лабораторных исследований, выполняемых в клинико-диагностических лабораториях медицинских организаций. Соблюдение этих требований обеспечивает уровень аналитической надежности результатов лабораторных исследований, необходимый для уверенного использования этих результатов при принятии клинических решений.

Настоящий стандарт может использоваться всеми организациями, учреждениями и предприятиями, а также индивидуальными предпринимателями, деятельность которых связана с оказанием медицинской помощи.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений

ГОСТ Р 53133.2-2008 Технологии лабораторные клинические. Контроль качества клинических лабораторных исследований. Часть 2. Правила проведения внутрилабораторного контроля качества количественных методов клинических лабораторных исследований с использованием контрольных материалов

ГОСТ 8.315-91* Государственная система единства измерений. Стандартные образцы. Основные положения, порядок разработки, аттестации, утверждения, регистрации и применения

* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 8.315-97, здесь и далее по тексту. — Примечание изготовителя базы данных.

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Правила оценки аналитической надежности методов клинических лабораторных исследований

3.1 Общие положения

Современная номенклатура клинических лабораторных исследований насчитывает свыше тысячи лабораторных тестов, позволяющих при условии их оправданного назначения, правильного выполнения и обоснованной интерпретации результатов получить в приемлемые сроки аналитически надежные и клинически высокоинформативные сведения.

Аналитическая надежность исследований представляет собой важную составляющую качества исследований, характеризующую степень достоверности лабораторных данных об изучаемом аналите и тем самым определяющую возможность использования их при принятии клинических решений: для установления диагноза, назначения необходимых лечебных мер, оценки тяжести болезни и эффективности проводимого лечения. Для предотвращения предоставления недостоверной лабораторной информации аналитическая надежность лабораторных результатов должна соответствовать определенным требованиям, соблюдение которых обеспечивает их приемлемость для клинического использования.

Настоящий стандарт разработан для установления объективно обоснованных способов и критериев оценки аналитической надежности клинических лабораторных исследований.

3.2 Принципы клинической лабораторной аналитики

Биоматериалы человека представляют собой сложные системы — смеси различных веществ и клеток, являющихся компонентами, то есть очерченными частями системы. В аналитике компоненты системы подразделяют на "аналиты", "конкомитанты" и "растворители"; последние два вида компонентов обозначают как "матрицу". Матрица охватывает все компоненты материальной системы, исключая аналит. Аналит — компонент пробы, указанный в названии исследуемого свойства или измеряемой величины.

В клинической лабораторной аналитике аналиты могут иметь различный характер:

— химических элементов, ионов, неорганических молекул;

— органических структур с малой молекулярной массой;

— макромолекул с известной или приблизительно установленной структурой и специфическими биологическими свойствами;

— клеток, их структурных элементов или клеточных систем,

— микроорганизмов, их структуры и свойств;

— паразитарных организмов, их структуры и свойств.

В процессе клинического лабораторного исследования решается несколько аналитических задач:

— разделение биологической смеси веществ/клеток; выделение из нее нужного компонента;

— детекция (идентификация) искомого компонента;

— количественная оценка содержания определенного компонента.

Клинические лабораторные исследования выполняют с применением аналитических технологий (методов исследования). Клинико-лабораторная аналитическая технология — это совокупность процедур, производимых с образцами биоматериала пациента и представляющих собой воздействия физического, химического и биологического характера, направленные на разделение биологической смеси веществ/клеток, обнаружение, идентификацию и/или количественную оценку искомого компонента — аналита.

Аналитическая технология имеет в своей основе определенный аналитический принцип, то есть закономерное взаимодействие используемых для анализа физических, химических или биологических факторов с искомым аналитом, обусловленное известными свойствами этого аналита и приводящее к генерации соответствующего сигнала, который может быть воспринят и оценен визуально или с помощью прибора (см. приложение А).

Аналитическая надежность клинических лабораторных исследований характеризуется свойствами методов, которыми они выполняются:

а) для количественных методов:

1) точностью (правильностью и прецизионностью) измерений,

2) аналитической чувствительностью,

3) аналитической специфичностью.

б) для неколичественных (качественных) методов исследования — частотой совпадения обнаружения патологических отклонений изучаемого компонента биоматериала с объективно подтвержденным наличием соответствующего заболевания.

Целевым параметром аналитической надежности клинических лабораторных исследований является их способность достоверно разграничивать свойственные состояниям здоровья и патологии значения содержания определенных аналитов в составе биоматериалов. При разграничении значений лабораторных результатов, свойственных состоянию здоровья, от состояния патологии следует учитывать, что результаты лабораторных исследований проб биоматериалов пациентов отражают содержание искомых веществ или клеток в организме обследуемого с некоторой степенью неопределенности, то есть с дисперсией числовых значений. Для уверенного различения отклонений, обусловленных патологией и называемых патологической вариацией, они должны быть дифференцированы от таких колебаний результатов исследований, закономерности которых аналогичны вариации результатов при любой процедуре измерения — аналитической вариации.

Основным фактором неопределенности лабораторных результатов, отличающимся по своему характеру от аналитической вариации, является биологическая вариация, то есть изменения состава биоматериалов человека, отражающие протекание в организме процессов жизнедеятельности, характеризующихся сочетанием устойчивости в определенных рамках постоянства внутренней среды (гомеостаза) и динамических колебаний вокруг точки гомеостаза. Внутрииндивидуальная (персональная) биологическая вариация отражает колебания проявлений физиологических функций вокруг определенных гомеостатических точек у обследуемого лица. Межиндивидуальная или групповая биологическая вариация, подчиняющаяся статистическим закономерностям, представляет собой интервалы колебаний гомеостатических точек групп людей, объединенных по определенному признаку (пол, возраст, этническая или профессиональная принадлежность и т.п.).

Читайте также:  Гост сборный железобетон для колодцев

Частными проявлениями биологической вариации, отражающими реакцию организма на различные факторы внешней среды, являются преаналитическая вариация, обусловленная влиянием условий подготовки обследуемого к лабораторному тесту и взятия образца биоматериала, и ятрогенная вариация, отражающая различного рода диагностические и лечебные воздействия на пациента перед проведением лабораторного теста.

В качестве основы для оценки точности различения патологической и аналитической вариаций и для установления единых требований применительно к каждому аналиту принято имеющее естественную фундаментальную основу свойство состава биоматериалов человека — биологическая вариация в различных комбинациях ее компонентов — внутрииндивидуальной и межиндивидуальной вариаций.

Данные о параметрах биологической вариации аналитов, основанные на сведениях, собранных за ряд лет в мировой специальной литературе, приведены в приложении Б.

3.3 Общие требования к точности количественных клинико-лабораторных исследований (измерений)

Точность (правильность и прецизионность) количественных клинических лабораторных исследований (измерений), подобно любым измерениям, характеризуется размерами случайной и систематической погрешности их результатов. Разработка объективно обоснованных требований к точности клинических лабораторных исследований состоит в установлении предельно допустимых значений аналитических погрешностей количественных методов исследований (измерений) физических величин (состава и свойств компонентов биологических материалов, аналитов) в образцах биологических материалов, взятых у пациентов.

В соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 при оценке точности измерений каждый результат измерений рассматривают как сумму трех составляющих

где — общее среднее значение (математическое ожидание);

— лабораторная составляющая систематической погрешности в условиях повторяемости;

— случайная составляющая погрешности каждого результата измерения в условиях повторяемости.

Общее среднее значение совокупности результатов измерений или "принятое опорное значение" используется в условиях, когда истинное значение измеряемой физической величины (эталонное значение измеряемой величины в узаконенных единицах) не может быть установлено из-за отсутствия необходимого эталона, обеспечивающего воспроизведение, хранение и передачу соответствующих значений величин, необходимых для определения погрешности измерений. Оно может быть получено как теоретическое или установленное значение, основанное на научных принципах, или как приписанное (согласованное) или аттестованное значение, основанное на экспериментальных работах, cогласно ГОСТ 8.315, а также как среднее значение заданной совокупности результатов измерений. Систематическая погрешность [разность между математическим ожиданием результатов измерений и истинным (принятым опорным) значением] характеризует правильность измерений, то есть степень близости результата измерений к истинному значению измеряемой величины, а на практике — к принятому опорному значению. В реальных условиях измерений в клинико-диагностической лаборатории лабораторная составляющая систематической погрешности (смещение) при выполнении конкретного метода измерений относится к общему среднему результату измерений или к установленному, аттестованному значению.

Случайная составляющая погрешности результата измерения характеризует прецизионность, то есть степень близости друг к другу независимых результатов измерений, полученных в конкретных регламентированных условиях. Она не имеет отношения к истинному или установленному, аттестованному значению измеряемой величины.

Для количественных методов исследований разрабатываются требования к характеристикам повторяемости и прецизионности, отражающим размер случайной погрешности, проявляющейся в дисперсии результатов однородных измерений и выражаемой среднеквадратичным отклонением или коэффициентом вариации (см. ГОСТ Р ИСО 5725-1, раздел 6).

При расчете базового (желательного) уровня математически ожидаемого при бесконечно большом числе исследований значения случайной аналитической погрешности, исходят из того, что предельно допустимая случайная аналитическая погрешность, характеризуемая коэффициентом вариации, при незначительном аналитическом смещении должна составлять:

Источник

Как выбрать стандартный образец?

impurities_standards.jpg

Как выбрать стандартный образец органического соединения? Где взять фармацевтические СО? Что делать если нужный СО нигде не продается?

Содержание

Что такое стандартный образец?

Базовый международный стандарт ISO Guide 30:2015 дает общее определение стандартному образцу

Стандартный образец (СО) [reference material, RM]: вещество, достаточно однородное и стабильное по отношению к одному или нескольким определенным свойствам, для того чтобы использовать его в соответствии с назначением в измерительном процессе

ISO Guide 30:2015 «Terms and definitions used in connection with reference materials»

Стандартные образцы используют в качестве “эталонов” при идентификации веществ, для градуировки приборов при проведении количественного анализа, валидации методик и контроля качества результатов измерений.

Таким образом, стандартный образец это вещество с точно установленным показателем (который называется “аттестованным показателем”)

В зависимости от назначения СО могут нормироваться разные показатели

Классификации СО

  • по природе нормируемой величины
    • СО состава (например, с точно установленной массовой долей основного вещества)
    • СО свойств (например, с точно известной температурой плавления).
    • для качественного анализа
    • для количественного анализа
    • стандартные образцы (RM)
    • сертифицированные (аттестованные) стандартные образца (CRM)
    • первичные СО
    • вторичные СО
    • фармацевтические СО
    • фитостандарты
    • стандарты для экологического контроля
    • и др.
    • международные СО
    • национальные (государственные) СО
    • отраслевые СО
    • СО предприятия

    СО для идентификации (качественного анализа)

    rm_1.png

    Подтверждение подлинности субстанции с использованием стандартного образца :
    ВЭЖХ (слева); УФ-спектроскопия (справа)

    В таблице приведены показатели, по которым аттестуют СО для качественного анализа, и примеры применения таких СО при разработке, валидации методик и анализе

    — хром. чистота
    — влажность

    Анализ
    — определение подлинности субстанции методами ИК, УФ-ВИД, по времени удерживания на хроматограмме
    — определение подлинности действующего вещества в препарате методом ВЭЖХ

    Анализ
    — проверка пригодности хроматографической системы

    Разработка
    — идентификация примеси по времени удерживания на хроматограмме

    Валидация
    — валидация селективности методик анализа примесей (хроматография)

    СО для количественного анализа

    rm_2.png

    Определение действующего вещества в препарате методом ВЭЖХ: слева — раствора сравнения , справа — испытуемый раствор . Для приготовления раствора сравнения с концентрацией 25,1 мг/мл использован стандартный образец с точно известной массовой долей основного вещества (99,5 ± 0,5)%

    В таблице приведены показатели, по которым аттестуют СО для количественного анализа, и примеры применения таких СО при разработке, валидации методик и анализе

    массовая доля основного вещества

    — хром. чистота
    — влажность

    Анализ
    — количественное определение действующего вещества в препарате методом ВЭЖХ
    — контроль качества результатов измерений
    — подтверждение подлинности субстанции методом ВЭЖХ
    — подтверждение подлинности действующего вещества в препарате методом ВЭЖХ

    Валидация
    — оценка правильности при валидации методик анализа препарата (методом ВЭЖХ), субстанции (методом титрования)

    Анализ
    — количественное определения примесей в субстанции и препарате методом ВЭЖХ
    — проверка пригодности хроматографической системы
    — контроль качества результатов измерений

    Разработка
    — идентификация примеси (по времени удерживания на хроматограмме)
    — определение коэффициента чувствительности примеси относительно основного вещества

    Валидация
    — оценка правильности при валидации методик анализа примесей методом ВЭЖХ в субстанции и препарате

    Сертифицированные СО (CRM)

    Certified reference material (CRM) — reference material (RM) characterized by a metrologically valid procedure for one or more specified properties, accompanied by an RM certificate that provides the value of the specified property, its associated uncertainty, and a statement of metrological traceability

    ISO Guide 30:2015

    Т.е. сертифицированный (аттестованный) стандартный образец (CRM), в отличие от стандартного образца (RM)

    • имеет точно установленное аттестованное значение
    • аттестованное значение установлено в лаборатории, аккредитованной по ИСО 17025
    • значение приведено с неопределенностью
    • значение имеет метрологическую прослеживаемость к эталонам
    • обязательно сопровождается паспортом

    Кроме того, производитель CRM должен подтвердить свою компетентность путем аккредитации по стандарту ISO Guide 34

    example_CRM.png

    Пример паспорта на CRM

    Зарубежные производители и поставщики CRM, RM и аналитических стандартов

    Первичные и вторичные стандартные образцы

    Рассмотрим эту классификацию на примере образцов для качественного анализа (идентификации)

    Подлинность (структура) установлена первичными методами: масс-спектрометрией, спектроскопией ЯМР

    Дополнительные показатели: хроматографическая чистота, элементный состав (CHNS)

    Российское законодательств и стандартные образцы

    В сфере государственного регулирования обеспечения единства измерений применяются стандартные образцы утвержденных типов

    п. 2, статья 8, глава 2 ФЗ № 102 Об обеспечении единства измерений

    Т.е. для применения в сферах, относящихся к «области государственного регулирования» должны применяться аттестованные стандартные образцы (CRM), признанные государством — государственные стандартные образцы (ГСО)

    Что входит в «область государственного регулирования обеспечения единства измерений» написано в п.3, статьи 1 ФЗ № 102

    Для применения в сферах, не относящихся к «области государственного регулирования», предприятия могут сами решать, какие СО использовать:

    • государственные СО
    • отраслевые СО
    • СО предприятия

    Еще, действует два ГОСТа, посвященных СО

      Государственная система обеспечения единства измерений (ГСИ). Стандартные образцы материалов (веществ). Основные положения Стандартные образцы. Термины и определения, используемые в области стандартных образцов

    ГОСТ 32934-2014 является переводом недействующей редакции 1992 года ISO Guide 30 (действующая редакция — ISO Guide 30:2015)

    Кроме того, любой ГОСТ на территории РФ доброволен к применению

    добровольность применения заинтересованным лицом документов в области стандартизации и обязательность соблюдения указанным лицом требований, содержащихся в этих документах, в случае объявления об их использовании, а также в случае определения обязательности исполнения требований стандартов в рамках контрактных (договорных) обязательств

    ГОСТ Р 1.0-2012, пункт 4

    Надо учитывать, что присутствует сильная отраслевая специфика. Часто регуляторы устанавливают свои требования к использованию СО.

    Производство стандартных образцов в России

    IMG_6163.JPG

    Исторический сложилось, что отечественные производители выпускают в основном стандарты ранга ГСО, используемые для работы в области «государственного регулирование обеспечения единства измерений». Стандартных образцов ранга RM производится существенно меньше.

    Впуск и «аттестация» ГСО требует больших затрат и сроков. Один из ведущих российский производителей СО пишет о проблемах законодательного и административного характера

    Этим объясняется весьма скромная номенклатура СО органических соединений, производимых отечественными предприятиями. При том что есть хорошая научно-техническая база для создания СО органических соединений ранга CRM. Например, на базе Уральского НИИ метрологии работают две профильные лаборатории: лаборатория 241, лаборатория 223, издается журнал Стандартные образцы.

    Разработка государственного вторичного эталона и стандартных образцов состава на основе жидкостной и газовой хроматографии / О.С. Шохина [и др.] // Стандартные образцы. 2017. Т. 13. № 1. С. 9–26. DOI 10.20915/2077-1177-2017-13-1-9-26

    Реактивы и чистые вещества (non-RM)

    Для многих органических соединений стандартные образцы просто не выпускаются. А проводить анализ надо. В этом случае для идентификации, количественного анализа и валидации могут применяться реактивы (х.ч., ч.д.а.) и чистые вещества

    Такой подход широко применяется

    • при проведении научных исследований
    • на этапе разработки методик

    При переходе разработки на стадию промышленного производства, регистрации фарм. субстанции или препарата из таких чистых веществ можно сделать, например первичный (primary) стандартный образец (RM) предприятия, проведя аттестацию по ключевым показателям с помощью первичных методов

    Поставщики химических веществ реактивной квалификации:

    Компании, специализирующиеся на заказном органическом синтезе:

    Фармацевтические стандартные образцы

    Фармацевтические СО — стандартные образцы, предназначенные для анализа лекарственных средств (фарм. субстанций и лекарственных препаратов)

    В области анализа лекарственных средств главный документ — Государственная фармакопея XIII (на основании приказа МЗ РФ № 771 от 29 октября 2015)

    Фармакопейная статья ОФС.1.1.0006.15 “Фармацевтиечские субстанции” говорит следующее:

    В качестве СО при анализе фарм. субстанций следует использовать фармакопейные стандартные образцы, аттестованные уполномоченным фармакопейным органом

    ОФС.1.1.0006.15 “Фармацевтические субстанции”, ГФ XIII

    К сожалению, отечественных фармацевтических СО пока нет. Поэтому приходится использовать стандартные образцы (CRM) фармакопей Евреопы (EP) и США (USP):

    Фармакопейные стандартные образцы импортного производства имеют свои недостатки:

    • часто малый объем: 10-100 мг — хватает на 1-2 анализа
    • высокая стоимость (50-300$)
    • срок поставки 90 дней и более

    Для некоторых соединений СО, аттестованные уполномоченным фармакопейным органом вообще отсуствуют

    При их [CО, аттестованных уполномоченным фармакопейным органом, прим. авт.] отсутствии для идентификации и оценки содержания действующего вещества должны использоваться первичные стандартные образцы

    ОФС.1.1.0006.15 “Фармацевтические субстанции”, ГФ XIII

    Первичные (primary) СО могут быть различного ранга: CRM, RM, ГСО, СО предприятия. Чаще всего используются «стандартные образец предприятия»

    Фитостандарты

    Фитостандарты — стандартные образцы для контроля качества лекарств растительного происхождения. Их используют для контроля содержания биологически активных веществ в растительном сырье, полупродуктах, концентратах и лекарственных средствах на основе растительного сырья.

    Например, согласно фармакопейной статье ФС.2.5.0036.15, в корнях и корневищах в Родиолы розовой нормируют содержание биологически активных веществ

    сумма гликозидов коричного спирта в пересчете на розавин не менее 1 %
    салидразида не менее 0,8 %

    Для количественного определения БАВ методом ВЭЖХ используют стандартные образцы (СО) розавина и салидразида.

    sal_ros.png

    Шемерянкина Т.Б. и др. Требования к качеству и методом анализа фармакопейных СО растительного происхождения, Ведомости НЦЭСМП, №1, 2014, стр. 51-54

    Что делать, если нужный СО нигде не продается?

    При их [CО, аттестованных уполномоченным фармакопейным органом, прим. авт.] отсутствии для идентификации и оценки содержания действующего вещества должны использоваться первичные стандартные образцы

    ОФС.1.1.0006.15 “Фармацевтические субстанции”, ГФ XIII

    Если нужного СО нет среди EP CRS и USP standards, а также среди покупных первичных стандартов, остается единственный вариант — аттестовывать первичный стандартный образец предприятия (СОП)

    Первичный СО для идентификации (качественного анализа)

    Подлинность (структура) установлена первичными методами: масс-спектрометрией (газовой или жидкостной), спектроскопией ЯМР (1H, 13C)

    Дополнительный показатель: хроматографическая чистота

    Подлинность (структура) установлена первичными методами: масс-спектрометрией (газовой или жидкостной), спектроскопией ЯМР (1H, 13C)

    Массовая доля основного вещества (МДОВ) измерена прямым титриметрическим методом по валидированной методике и методом «баланса масс» (100% — примеси — потеря массы при высушивании)

    Источник

    V.1 Аналитические показатели

    Аналитическая чувствительность отражает наименьшее количество (концентрацию) обнаруживаемого вещества в исследуемом материале.

    Аналитическая специфичность определяется, как способность теста обнаруживать только искомое вещество или его маркер.

    Клинические показатели:

    Клиническая чувствительность. Оценка выполнения диагностического теста базируется на его способности корректно идентифицировать действительно-положительные и действительно-отрицательные образцы. При исследовании образцов на какую-либо инфекцию термин диагностическая (или клиническая) чувствительность отражает пропорцию инфицированных исследуемых материалов точно определенных как положительный результат.

    Клиническая специфичность. Диагностическая (или клиническая) специфичность представляет собой пропорцию полученных отрицательных результатов в исследуемом материале, не содержащем субстанцию, на обнаружение которой и был разработан тест.

    Для оценки показателей качества тест-систем обязательно должен использоваться материал, сочетающий потенциально взаимодействующие между собой факторы, непосредственно влияющие на результат проводимого анализа, такие как состав исследуемого материала, условия хранения, условия получения исследуемого материала, тепловая инактивация, а также наличие антикоагулянтов, продуктов гемолиза, гиперлипемия.

    Более конкретно процедура получения Европейского Сертификата соответствия (СЕ) рассмотрена на примере фирмы Орженикс, которая в 2002 — 2003 годах повторно сертифицировала свою продукцию.

    В таблице 7 приведены данные о материалах, использованных для определения показателей качества тест-систем ИммуноКомб в соответствии с требованиями CEN (более подробно см. главы III, IV).

    Таблица 7. Количество и типы материалов, необходимых для оценки работы диагностикумов, используемых при скрининге крови на анти-ВИЧ-1, анти-ВИЧ-2, anti-HTLV I, anti-HTLV II, anti-HCV, HBsAg, и anti-HBc.

    • Образцы включали 40 не-B субтипов; каждый субтип был представлен минимум тремя образцами.
    • Образцы включали генотипы 1a–4a, представленные минимум 20 образцами каждого генотипа. Образцы также включали генотипы 4 не-a и 5, представленные минимум 10 образцами каждого генотипа.
    • Включали различные субтипы.
    • Определяли другие HBV маркеры.
    • Дополнительные 10 панелей были утверждены уполномоченным лицом.
    • Стандарт Франции и Великобритании – 0,5 нг/мл.

    Оценка качества тест-систем ИммуноКомб производилась на основании сравнения с высококачественным тестом Abbot и ORTHO, утверждённым CEN, при привлечении групп населения, сравнимых по численности с населением Европы.

    Положительные образцы различных генотипов, отбираемые у пациентов на разных стадиях болезни, имели различный набор антител, различные субтипы и т.д. Выявленные при скрининге крови положительные образцы (кроме тестов HBsAg) подтверждались как положительные тестом, имеющим маркировку CE. Новые тесты HBsAg90 сравнивались по качеству с уже имеющимися тестами HBsAg.

    Отрицательные образцы, используемые для оценки теста, были взяты у целевых групп, для которых предназначен тест, таких как доноры, госпитализированные пациенты, беременные женщины.

    Определение первой фазы инфекции (сероконверсии) было неотъемлемой частью испытания. При этом обязательным было, чтобы повторное исследование тех же и дополнительных сероконверсионных панелей, отобранных уполномоченным лицом, подтверждало первичные данные.

    Более строгие требования, основанные на критериях ADA и AFSSAPS, Европейский комитет по стандартизации предъявляет к тестам, предназначенным для скрининга доноров [23]. Чувствительность таких тестов должна быть 100%, а специфичность – не менее 99,5% для ELISA и более 99% для RST тестов. Более того, для тестов ВИЧ обязательным условием является определение не менее 50% пер-сероконверсионных образцов (критерий AFSSAPS), а также сывороток не-B субтипа позитивных пациентов (критерий ADA); аналитическая чувствительность для HBsAg тестов должна быть не менее 0,5 нг/мл.

    Чтобы подтвердить соответствие качества тестов ИммуноКомб для скрининга донорской крови, исследования были проведены в двух центрах сдачи крови, обследованы две группы доноров, при этом представители первой группы частично входили и во вторую группу. Специфичность рассчитывалась на основе частоты повторений ложно-позитивных результатов у доноров, негативных по определяемому маркеру. Клинические испытания тест-систем ИммуноКомб, согласно требованиям CEN, проводились не только на сероконверсионных панелях Serological(США), BBI(США), но и на пред-сероконверсионных и пер-сероконверсионных панелях BBI; также были исследованы положительные образцы ВИЧ-1 субтип 0 и не-B субтип (более подробно см. главу III).

    Все сероконверсионные сыворотки были подтверждены Вестерн-блотом и ПЦР. Пред-сероконверсионные состояния (отсутствие антител, наличие только антигена p24) определялось только RNA тестами. Пер-сероконверсионные сыворотки (появление первых антител к gp160 и p24) были отрицательны в Вестерн-блоте и положительны в ПЦР и HIV антигене.

    Испытания тестов ИммуноКомб, определяющих вирусные гепатиты, описаны в главе IV.

    На основании данных, полученных в ходе испытаний, были вычислены аналитические и клинические показатели (табл. 8).

    Таблица 8. Аналитические и клинические показатели тест-систем ИммуноКомб

    Наименование Диагностическая
    (клиническая) чувствительность
    Диагностическая (клиническая)
    специфичность
    Аналитическая чувствительность
    ВИЧ 1+2 Bispot 100 99,5
    ВИЧ 1+2 CombFirm (иммуноблот) 99,7 100
    HCV 100 99,5
    HBs Ag 90 100 99,7 0,25 нг/мл
    HBc IgG 96 100
    HBc IgM 100 99
    anti HBs Ag 100 98,3

    Как видно из таблицы, качественные характеристики тестов ИммуноКомб полностью удовлетворяют требованиям CE-STS и могут быть использованы как для обследования пациентов, так и для скрининга донорской крови.

    Кроме того, проведённые испытания показали, что

    1. Тесты ИммуноКомб ВИЧ 1+2:

    • выявляют первые ранние антитела сероконверсии на 8,5 дней раньше Вестерн-блот, показывая незначительную разницу (0,8 дня) с подтверждающим тестом RIBA
    • выявляют персероконверсионное состояние
    • выявляют не-B субтип положительных сывороток
    • показывают 100% чувствительность при определении антител к ВИЧ-1 субтип 0 и ВИЧ-2 положительных сывороток
    • не только выявляют антитела к ВИЧ 2, но и строго дифференцируют антитела к ВИЧ 1 и ВИЧ 2.

    2. Аналитическая чувствительность тестов ИммуноКомб HBsAg соответствует Европейскому стандарту.

    Источник

    Чувствительность аналитических реакций с примерами решения

    Аналитическими реакциями, пригодными для качественного анализа, являются реакции, сопровождающиеся каким-нибудь внешним эффектом: выпадением и растворением осадка, выделением газообразных веществ, изменением окраски. Выбирая реакции для химического анализа, руководствуются законом действующих масс и представлениями о химическом равновесии в растворах. Для успешного проведения аналитической реакции необходимо соблюдать ряд тех или иных условий, обеспечивающих получение достоверных результатов. Такими условиями являются pH раствора, температура, маскирование или удаление мешающих ионов. Однако даже при соблюдении всех этих условий аналитическая реакция может не дать положительного эффекта, если недостаточна концентрация обнаруживаемого иона в растворе. С концентрацией обнаруживаемого иона в растворе связано понятие «чувствительность» аналитической реакции.

    Чувствительность аналитических реакций характеризуется пределом обнаружения

    Предел обнаружения (г/мл) — минимальная или предельная концентрация; это наименьшая концентрация иона или вещества (далее — компонента) в растворе, при которой он может быть обнаружен с помощью данной аналитической реакции с заданной доверительной вероятностью.

    Предел обнаружения m (мкг) — открываемый минимум; это наименьшая масса определяемого компонента, с заданной доверительной вероятностью обнаруживаемая данной аналитической реакцией в минимальном объеме предельно разбавленного раствора.

    Предельное разбавление, (мл/г) — максимальный объем раствора, в котором обнаруживается 1 г компонента с помощью данной реакции.

    Минимальный объем предельно разбавленного раствора, (мл) — наименьший объем анализируемого раствора, необходимый для обнаружения компонента в данной аналитической реакции.

    Эти характеристики чувствительности связаны между собой соотношением:

    В качественном анализе обычно используют реакции с (1 гамма), равным 1 мкг.

    Показатель чувствительности, , аналитической реакции равен:

    В количественном химическом анализе показателем чувствительности является нижняя граница определяемых содержаний , являющаяся метрологической характеристикой конкретной методики.

    Пример 1.6.

    Предельное разбавление ионов исследуемого раствора составляет 0,06 мл. Вычислить открываемый минимум.

    Решение:

    По формуле (1.1) находим:

    Пример 1.7.

    Для обнаружения ионов меди действием раствора аммиака равен 0,05 мл, открываемый минимум этой реакции 0,2 мкг. Определить предельную концентрацию ионов меди в растворе.

    Решение:

    С учетом формулы (1.1) рассчитываем :

    Пример 1.8.

    Предельно допустимая концентрация (ПДК) иона аммония в питьевой воде 2,0 мг/л. Предел обнаружения его по реакции с реактивом Несслера составляет 0,002 мкг. Проверьте расчетами возможность обнаружения иона аммония в 1,0 мл воды при содержании, равном ПДК.

    Решение:

    Рассчитаем минимальную концентрацию иона аммония в растворе, при которой реакция с реактивом Несслера дает положительный эффект:

    Сравнивая полученное значение значительно ниже ПДК.

    Пример 1.9.

    Катионы серебра открываемый минимум, предельное разбавление и показатель чувствительности в данной аналитической реакции.

    Решение:

    Найдем :

    Вычислим показатель чувствительности:

    Используя формулу (1.1), найдем :

    Эти примеры взяты со страницы примеров решения задач по аналитической химии:

    Возможны вам будут полезны эти страницы:

    Изучу , оценю , оплатите , через 2-3 дня всё будет на «4» или «5» !

    Откройте сайт на смартфоне, нажмите на кнопку «написать в чат» и чат в whatsapp запустится автоматически.

    Образовательный сайт для студентов и школьников

    Копирование материалов сайта возможно только с указанием активной ссылки «www.lfirmal.com» в качестве источника.

    © Фирмаль Людмила Анатольевна — официальный сайт преподавателя математического факультета Дальневосточного государственного физико-технического института

    Источник